Вивчення кінетики інгібування тирозинази деякими похідними бензіліденамінофенолів The study of tyrosinase inhibition kinetics by certain benzylidene aminophenol derivatives
«Вивчення кінетики інгібування тирозинази деякими похідними бензіліденамінофенолів». «The study of tyrosinase inhibition kinetics by certain benzylidene aminophenol derivatives» В даній дипломній роботі з грибів Agaricus bisporus виділено препарат тирозинази з виходом білка 0,82 мг/г грибів, вмістом міді 0,19%, питомою активністю за тирозином 391 од/мг білка за хв і за дигідрокси-L-фенілаланіном 4340 од/мг білка за хв. Метод виділення ензиму модифіковано введенням поліетиленгліколю в процесі екстракції, що сприяє зменшенню вмісту поліфенолів в 3 рази і приводить до збільшення активності ензиму на 25 %. Визначені кінетичні параметри окиснення тирозину, що каталізується виділенною тирозиназою, показано, що константа Міхаеліса окиснення субстрату в присутності виділеного ензиму становить 327,6 мкмоль/дм3, що відповідає даним, представленим в літературі, максимальна швидкість реакції дорівнювала 416,7 од/мг білка за хв. Виявлено, що 2-гідроксибензиліден-2-амінофенол і бензиліденанілін відносяться до неконкурентних інгібіторів тирозинази, для яких характерно збереження значення константи Міхаеліса при зменшенні максимальної швидкості. Показано, що 2-дигідроксибензиліден-2-амінофенол має значно сильніший вплив на активність тирозинази, його Кі в 50 разів нижча за таку незаміщеного бензиліденаніліну. В розділі “Охорона праці” приведений перелік основних шкідливих факторів і заходи, спрямовані на усунення їх дії. КЛЮЧОВІ СЛОВА: ТИРОЗИНАЗА, AGARICUS BISPORUS, ІНГІБІТОР, КІНЕТИЧНІ ПАРАМЕТРИ, БЕНЗИЛІДЕНАНІЛІНИ.
СПИСОК СКОРОЧЕНЬ 5 ВСТУП 1 ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ 1.1 Структура, функціональні особливості, активність ферменту тирозинази Agaricus bisporus 1.2 Інгібітори тирозинази 1.2.1 Механізм утворення меланіну та способи попередження меланогенезу 1.2.2 Основні групи інгібіторів тирозинази 2 МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ЕКСПЕРИМЕНТУ 2.1 Матеріали 2.2 Методи експерименту 2.2.1 Виділення тирозинази з грибів Agaricus bisporus 2.2.2 Визначення загального вмісту поліфенолів 2.2.3 Визначення вмісту білка методом Лоурі в модифікації Хартрі 2.2.4 Визначення активності тирозинази за L-тирозином 2.2.5 Визначення активності тирозинази за L-ДОФА 2.2.6 Визначення рН-оптимуму ферменту 2.2.7 Визначення температурного оптимуму ферменту 2.2.8 Визначення впливу органічних розчинників на активність тирозинази 2.2.9 Визначення кінетичних параметрів окиснення тирозину з використанням тирозинази 2.2.10 Визначення кінетичних параметрів інгібування тирозинази 3. ОБГОВОРЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ 3.1 Модифікація методу виділення тирозинази з грибів Agaricus bisporus 3.2 Дослідження фізико-хімічних властивостей виділеної тирозинази 3.3 Вивчення кінетичних параметрів окиснення тирозину, що каталізується тирозиназою 3.4 Кінетичні особливості інгібування тирозинази 4 ОХОРОНА ПРАЦІ 4.1 Аналіз можливих небезпечних і шкідливих факторів у лабораторії 4.1.1 Повітря робочої зони 4.1.2 Мікроклімат 4.1.3 Виробниче освітлення 4.1.4 Аналіз шуму у робочій зоні 4.1.5 Електробезпека 4.1.6 Пожежна безпека 4.2 Заходи, спрямовані на усунення або зниження впливу небезпечних та шкідливих факторів у лабораторії 4.2.1 Засоби підтримання чистоти робочого повітря 4.2.2 Заходи щодо нормалізації параметрів мікроклімату 4.2.3 Оптимізація освітлення 4.2.4 Засоби захисту від підвищеного рівня шуму 4.2.5 Захисні заходи у електроустаткуванні 4.2.6 Заходи з пожежної безпеки 4.3 Визначення витрат води на зовнішнє та внутрішнє гасіння пожежі виробничої будівлі